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GL色譜柱的選擇直接影響了分離效果的好壞,選擇合適的色譜柱可以縮短方法開發(fā)所需的時間,并且使方法更具穩(wěn)定性。柱越長,總柱效越高(n值越大),柱越長,分析時間也越長。GL色譜柱的柱效率與柱半徑平方成反比,內徑越小柱效越高,但內徑越大,柱容量也增加,允許進樣量就越多。當進樣量超過柱容量時,則因柱內每塊理論板內不能建立平衡,將會導致色譜蜂畸變,柱分辨率降低,重現(xiàn)性不好。因此對于復雜樣品需要準確分離,要使用小內徑柱子。分析大分子量化合物選擇大孔徑色譜柱;對于高pH值或者堿性化合物需要...
反相c18色譜柱是指利用非極性的反相介質為固定相,極性有機溶劑的水溶液為流動相,根據(jù)溶質極性(疏水性)的差別進行溶質分離與純化的洗脫色譜法。使用前,須先用甲醇或乙腈試劑以20倍柱體積低流速沖洗,作用是使固定相能充分潤濕、碳鏈舒展,使色譜柱的性能達到狀態(tài)。具體操作是,將配制好65%的乙腈/水沖洗后,把色譜柱進口端連接在色譜儀上,出口端放空(不可連上檢測器,以免污染了檢測器),以0.1ml/min~0.5ml/min的低流速將色譜柱中的清稀溶液吹干,過20分鐘后再接上檢測器,以1...
c18色譜柱鍵合到硅膠上的烷烴是18個碳,填充的是C18。適合分析弱極性物質里極性更弱的物質。分子量較小的物質,經(jīng)常用C18來進行分析和分離。C18柱的填料對色譜柱的影響,碳含量即填料中的含碳量。傳統(tǒng)的測量技術是將填料加熱到碳氫鍵斷裂,然后通過測定損失的重量或形成的二氧化碳來計算碳含量??梢酝ㄟ^增加碳鍵的長度或增加鍵合密度來增加碳含量。碳含量增加,柱子的保留值增加。鍵合相的色譜行為與鍵合密度有關,也與硅膠的密度及填料的表面積有關,填料的密度越高,填柱所需的硅膠量越多,柱子的含...
異構體分析參照液相色譜法測定。參與構造交互項的各組成部分對被解釋變量的影響依賴于交互項中其他部分的取值。蛋白類藥物具有的翻譯后修飾,如糖基化、N末端的焦谷氨酸化、C末端的賴氨酸截除、氧化、脫酰胺等,這些不同的翻譯后修飾組合可使蛋白分子產(chǎn)生無數(shù)種電荷異構體。另外,單抗在特定的條件下會發(fā)生降解、斷裂,形成低分子量的片段。這些異構體對于蛋白藥物的穩(wěn)定性及生物學功能發(fā)揮具有重要影響,需要用合適的方法進行分析。交互項和分組回歸關系在比較關鍵變量在兩個子群體的不同影響時,個人認為交乘項和...
c18色譜柱出廠時一般都封裝有甲醇或乙腈等有機溶劑。隨著時間的推移,色譜柱內的有機溶劑緩慢揮發(fā),色譜柱內可能出現(xiàn)氣泡。因此,新購買的色譜柱在使用前一般都要進行活化操作。c18色譜柱的基質:硅膠基質:通用的基質,強度大,化學修飾容易,但使用的pH值范圍有限(一般為2—8,特殊修飾的可以達到1—12)。聚合物基質:多為聚苯乙烯—二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂,化學穩(wěn)定,應用pH范圍寬,具有更強的疏水性,對蛋白質等樣品分離效果較好;但強度較小,有機溶劑可能導致聚合物溶脹而受損,批次重復...
鰲合樹脂屬于功能高分子材料,是近30余年來發(fā)展起來的一類有機高聚物吸附劑,是吸附樹脂的一種,由聚合單體和交聯(lián)劑、致孔劑、分散劑等添加劑經(jīng)聚合反應制備而成。聚合物形成后,致孔劑被除去,在樹脂中留下了大大小小、形狀各異、互相貫通的孔穴。因此大孔吸附樹脂在干燥狀態(tài)下其內部具有較高的孔隙率,且孔徑較大,大孔樹脂的表面積較大、交換速度較快、機械強度高、抗污染能力強、熱穩(wěn)定好,在水溶液和非水溶液中都能使用。鰲合樹脂能富集、分離不同母核結構的藥物,可用于單一或復方的分離與純化。但大孔吸附樹...
鰲合樹脂與離子交換樹脂不同,螯合樹脂在吸附溶液中的金屬離子時沒有離子交換,而是高分子上多配位官能團與金屬離子形成絡合物。如亞胺二乙酸樹脂在弱酸性和中性范圍內,與二價金屬離子形成了1:1的絡合物。亞胺二乙酸為螯合官能團。鰲合樹脂是一類能與金屬離子形成配位絡合物的功能高分子材料,對重金屬離子具有分離與富集作用,廣泛應用于重金屬廢水的處理。其吸附選擇性和吸附容量是評價螫合樹脂性能的兩個重要指標,其中,吸附容量取決于吸附材料的比表面積和表面功能團的密度,是影響水處理效率的關鍵因素。從...
尺寸排阻色譜柱是一款粒徑為2um,由表面鍵合二醇基的硅膠顆粒充填,主要針對小分子蛋白、蛋白片段、多肽、寡核苷酸的分離分析而開發(fā)。尺寸排阻色譜柱的尺寸排阻色譜法,是按分子大小順序進行分離的一種色譜方法。被廣泛應用于大分子分級,即用來分析大分子物質相對分子質量的分布。尺寸排阻色譜柱體積排阻柱有100、150及300三種孔徑選擇,廣泛的應用于生物分子及水溶性聚合物的分離與分析。尺寸排阻色譜柱包括分子量測定范圍不同的5種規(guī)格的色譜柱,可以將適合樣品分子量和分子量分布的不同級別的色譜柱...
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