使用SkillPak預(yù)裝柱實(shí)現(xiàn)快速穩(wěn)健的層析工藝放大

東曹SkillPak預(yù)裝柱平臺(tái)可從5 mL層析柱無(wú)縫放大到200 mL層析柱。借助該平臺(tái)，使用少量的樣品和耗材即可設(shè)計(jì)層析工藝。一旦在小試規(guī)模下確定了最佳條件，其工藝過(guò)程即可輕松轉(zhuǎn)至大規(guī)模應(yīng)用。

01使用AEX和CEX分離蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品

為了展示SkillPak出色的放大能力，我們使用了不同尺寸的層析柱（分別裝填了TOYOPEARL NH2-750F和Sulfate-650F填料）分離兩種不同的蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品。圖1和圖2是分離蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)UV信號(hào)的比較結(jié)果。

圖1 不同尺寸SkillPak (裝填了TOYOPEARL NH2-750填料)分離蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品

圖2  不同尺寸SkillPak (裝填了TOYOPEARL Sulfate-650F)分離蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品

分離結(jié)果顯示，不同尺寸層析柱上其洗脫曲線相似。線性鹽梯度下，隨著凈表面電荷的增加，蛋白質(zhì)逐漸脫落。不論何種情況，均可觀察到隨著柱體積的減小，保留體積向右移動(dòng)。這主要是因?yàn)橄到y(tǒng)死體積的不同影響，導(dǎo)致作為參比CV時(shí)，保留體積更高

02牛血清白蛋白 (BSA) 的動(dòng)態(tài)吸附載量

我們還在裝填了TOYOPEARL NH2-750填料的5 mL、50 mL和200 mL的SkillPak層析柱上測(cè)定了BSA的動(dòng)態(tài)吸附載量。

表1. 不同尺寸SkillPak上BSA的動(dòng)態(tài)吸附載量

BSA在不同尺寸的層析柱上的DBC值非常接近，最大偏差為4%，表明吸附能力與層析柱尺寸無(wú)關(guān)，這一點(diǎn)對(duì)于工藝放大時(shí)的上樣量來(lái)說(shuō)非常重要。

我們可以通過(guò)小試驗(yàn)證確認(rèn)其吸附能力，節(jié)省樣品和緩沖溶液。隨后，即可確定使用大型層析柱時(shí)所需的載量和最大上樣量。

03 BSA的洗脫曲線

圖3顯示了不同尺寸SkillPak層析柱上BSA的洗脫曲線，證明了層析柱尺寸并不影響洗脫曲線。色譜圖wan美重疊。wei一的區(qū)別是，最小柱體積的保留體積的偏移，這主要是因?yàn)橄到y(tǒng)死體積的不同影響所致。

圖3. 不同尺寸SkillPak上BSA的洗脫曲線

如您想了解SkillPak預(yù)裝柱的詳細(xì)信息，歡迎聯(lián)系我們索取產(chǎn)品資料。

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