c18色譜柱是一種常用的反相液相色譜柱,其表面涂有十八烷基硅烷(ODS)或類似疏水性物質(zhì)。在反相色譜中,非極性固定相與極性流動(dòng)相相結(jié)合,使得樣品中的各種組分根據(jù)其親水性或疏水性的不同而在柱子中的停留時(shí)間不同,從而實(shí)現(xiàn)分離。
c18色譜柱對(duì)色譜分離的影響主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面:
1、疏水性:疏水性是其主要的分離機(jī)制。非極性分子在C18柱上的保留時(shí)間會(huì)比極性分子長(zhǎng),因?yàn)榉菢O性分子更容易與疏水性的C18鏈發(fā)生相互作用。
2、選擇性:不同的類型可能有不同的碳鏈密度、長(zhǎng)度和鏈接方式,這會(huì)影響其選擇性。例如,可能更適合分離某些類型的化合物。
3、pH穩(wěn)定性:通常在pH2-8的范圍內(nèi)穩(wěn)定,但超出此范圍可能會(huì)導(dǎo)致硅膠基質(zhì)溶解或鍵合相降解。
4、溫度影響:溫度可以影響其分離效果。一般來說,提高溫度可以降低流動(dòng)相的粘度,從而增加樣品分子在流動(dòng)相中的擴(kuò)散速度,提高分離效率。
5、有機(jī)溶劑含量:在反相色譜中,常用的流動(dòng)相是水和有機(jī)溶劑(如甲醇或乙腈)的混合物。增加有機(jī)溶劑的比例通常會(huì)減少樣品在C18柱上的保留時(shí)間。
6、離子對(duì)試劑:有時(shí),為了改善某些化合物的峰形或分離度,會(huì)在流動(dòng)相中添加離子對(duì)試劑。這些試劑可以與樣品中的離子形成中性復(fù)合物,從而改變保留特性。
7、柱效和分辨率:粒徑、長(zhǎng)度和內(nèi)徑都會(huì)影響其柱效和分辨率。一般來說,粒徑越小,柱效越高,但同時(shí)背壓也會(huì)增加。
總之,c18色譜柱在液相色譜中起到了關(guān)鍵的作用,其物理和化學(xué)性質(zhì)都會(huì)影響到樣品的分離效果。選擇合適的C18柱和優(yōu)化色譜條件是實(shí)現(xiàn)有效分離的關(guān)鍵。